MSCs通過(guò)上調(diào)顆粒細(xì)胞AMH激素和FSH受體的表達(dá)，抑制顆粒細(xì)胞凋亡和卵泡閉鎖，促進(jìn)卵巢功能的恢復(fù)。臨床MSCs的產(chǎn)生需要大量的細(xì)胞，但高代MSCs體外擴(kuò)增可能導(dǎo)致細(xì)胞轉(zhuǎn)化。根據(jù)病情輕重，確定最佳劑量和給藥時(shí)間。
目前，來(lái)自骨髓、脂肪組織、臍帶、臍帶血、胎盤、羊水、子宮內(nèi)膜、臍帶沃頓膠和經(jīng)血等來(lái)源的MSCs已在實(shí)驗(yàn)中取得成功。
以下為原件：
間充質(zhì)干細(xì)胞在卵巢功能恢復(fù)中的作用
隨著再生醫(yī)學(xué)的發(fā)展，間充質(zhì)干細(xì)胞（mesenchymal stem cells，MSCs）作為一種恢復(fù)卵巢功能的方法越來(lái)越受到重視。從骨髓、脂肪、臍血、經(jīng)血和羊水中提取的MSCs可以改善卵巢功能。鑒于以往的研究和這方面的進(jìn)展，利用MSCs恢復(fù)卵巢功能的期望越來(lái)越高。本文綜述近年來(lái)MSCs在不孕癥或原發(fā)性卵巢功能不全中的潛在應(yīng)用，包括抗腫瘤治療的現(xiàn)狀。
間充質(zhì)干細(xì)胞的特性
間充質(zhì)干細(xì)胞（Mesenchymal stem cells，MSCs）是一種來(lái)源于人和哺乳動(dòng)物骨髓和骨膜的細(xì)胞，在體外培養(yǎng)過(guò)程中可以被分離和擴(kuò)增，同時(shí)保持誘導(dǎo)多種中胚層表型和組織的能力。簡(jiǎn)稱MSC可理解為間充質(zhì)干細(xì)胞、多能干細(xì)胞、間充質(zhì)祖細(xì)胞、骨髓基質(zhì)細(xì)胞、骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞、間充質(zhì)前體細(xì)胞、骨髓干細(xì)胞和多能干細(xì)胞
為了改進(jìn)這個(gè)術(shù)語(yǔ)的定義，國(guó)際細(xì)胞治療學(xué)會(huì)（ISCT）將間充質(zhì)干細(xì)胞定義為多潛能間充質(zhì)基質(zhì)細(xì)胞。建議保留“間充質(zhì)干細(xì)胞”一詞，指具有可塑性粘附特性的間質(zhì)組織細(xì)胞，指具有干細(xì)胞兩個(gè)基本特性（自我更新和向下分化多個(gè)譜系的能力）的亞群[5]。
ISCT對(duì)MSCs的定義提出了三個(gè)標(biāo)準(zhǔn)。首先，MSCs在標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)條件下必須是可塑的。其次，95%以上的MSCs必須表達(dá)CD105、CD73和CD90，但缺乏CD45、CD34、CD14或CD11b、CD79a或CD19和人類白細(xì)胞抗原（HLA）Ⅱ類表達(dá)。第三，這些細(xì)胞必須能夠在體外標(biāo)準(zhǔn)分化條件下分化為成骨細(xì)胞、脂肪細(xì)胞和軟骨母細(xì)胞[5]。
間充質(zhì)干細(xì)胞來(lái)源于成人或嬰兒的多種組織，包括脂肪組織、外周血、臍帶血、臍帶血、臍帶、臍帶膜、臍帶靜脈、沃頓臍帶凍、胎盤、基膜蛻膜、粗韌帶、羊水、羊膜、牙髓、人胎盤絨毛、胎膜，經(jīng)血、母乳和尿液[6]。
MSCs具有較強(qiáng)的調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答的能力，包括抑制T細(xì)胞增殖、影響樹(shù)突狀細(xì)胞成熟和功能、抑制B細(xì)胞增殖和終末分化、調(diào)節(jié)其他免疫細(xì)胞，如自然殺傷細(xì)胞和巨噬細(xì)胞等[7]。MSCs在細(xì)胞治療中的另一個(gè)作用是歸巢和跨內(nèi)皮細(xì)胞遷移。在循環(huán)中，MSCs通過(guò)趨化因子（c-cc motif）、粘附分子（P-選擇素和VCAM-1）、基質(zhì)金屬蛋白酶（MMPs；MMP-2和膜型1 MMP）通過(guò)血管系統(tǒng)轉(zhuǎn)運(yùn)到損傷部位[8]。骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞修復(fù)受損的組織部位后，與局部刺激密切相關(guān)，如惡臭細(xì)胞因子、Toll樣受體配體和低氧，這可刺激MSCs產(chǎn)生大量的生長(zhǎng)因子以促進(jìn)組織再生的多種功能[8 ]?；贛SCs的這些功能，Caplan建議將MSC的縮寫理解為“醫(yī)療信號(hào)細(xì)胞”
卵巢功能與卵巢早衰
卵泡是卵巢的功能單位，由卵母細(xì)胞及其支持細(xì)胞如顆粒細(xì)胞、卵泡膜細(xì)胞和基質(zhì)細(xì)胞組成。卵泡中的細(xì)胞每月釋放一個(gè)卵母細(xì)胞，產(chǎn)生生育能力和雌二醇、孕酮等激素，以維持婦女的整體健康和維持妊娠[10]。
卵巢早衰（POF）是一種神秘而復(fù)雜的疾病。POF的患病率為35歲以下婦女的250分之一和40歲以下婦女的100分之一。POF最重要的機(jī)制是濾泡功能障礙和濾泡衰竭[11]。
雖然POF的病因尚未完全闡明，但遺傳、內(nèi)分泌、旁分泌、線粒體功能障礙和代謝因素可影響卵泡池和卵母細(xì)胞的質(zhì)量[12]。
近年來(lái)，化療引起的POF已成為抗癌治療的主要長(zhǎng)期不良反應(yīng)，增加了不孕和退行性健康問(wèn)題的風(fēng)險(xiǎn)。這種對(duì)化療的反應(yīng)可能是年輕女性的一個(gè)特殊問(wèn)題，因?yàn)槁殉矁?chǔ)備的喪失與女性不孕的風(fēng)險(xiǎn)密切相關(guān)。抗癌藥物的卵巢毒性的確切機(jī)制尚未完全建立（13），這似乎取決于藥物的類型和所測(cè)試的細(xì)胞類型[14 ]?；|(zhì)細(xì)胞和顆粒細(xì)胞通過(guò)凋亡受到大多數(shù)抗癌藥物的強(qiáng)烈影響。已知卵母細(xì)胞通過(guò)包圍它們的基質(zhì)和顆粒細(xì)胞受到間接毒性的影響。
環(huán)磷酰胺（CTX）是一種烷基化劑，能誘導(dǎo)活性增殖細(xì)胞（如顆粒細(xì)胞和基質(zhì)細(xì)胞）DNA雙鏈斷裂，卵母細(xì)胞也會(huì)受到CTX等抗癌藥物的損傷[13]。
然而，另一個(gè)有趣的解釋是，原始卵泡不增殖，因此對(duì)DNA損傷不太敏感。靜息或激活狀態(tài)下的原始卵泡受細(xì)胞內(nèi)磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）-Akt-mTOR信號(hào)通路控制[15]。磷酸酶和張力素同系物（PTEN）是PI3K的可逆抑制劑，被稱為人類腫瘤抑制因子[16]。
抗癌藥物如CTX或順鉑被發(fā)現(xiàn)通過(guò)過(guò)度分泌導(dǎo)致原始卵泡功能衰竭[17]，卵母細(xì)胞特異性PTEN的缺失導(dǎo)致小鼠模型中原始卵泡池的過(guò)早激活[18]。
因此，維持生育能力和卵巢功能應(yīng)被視為育齡婦女接受化療的重要問(wèn)題。保存生育能力的幾種選擇，如胚胎、成熟卵母細(xì)胞或卵巢組織的冷凍保存。然而，大多數(shù)項(xiàng)目在癌癥治療前保留生育能力。因此，有必要探討恢復(fù)卵巢功能的可能途徑。
MSc治療與卵巢功能恢復(fù)
MSc治療被認(rèn)為是治療女性不孕癥或恢復(fù)卵巢功能的新選擇。
許多研究證實(shí)了不同來(lái)源的MSCs對(duì)POF動(dòng)物模型卵巢功能的保護(hù)作用（表1）[19-48]。這里的這些
與其他形式的細(xì)胞治療一樣，間充質(zhì)干細(xì)胞恢復(fù)卵巢功能的兩種不同給藥方法也被考慮。尾靜脈注射已被引入小鼠和大鼠模型，局部卵巢注射技術(shù)也得到了廣泛的發(fā)展[50]。在抗癌藥物化療引起的卵巢功能衰竭中，MSCs移植可誘導(dǎo)卵巢功能的恢復(fù)，包括雌二醇的產(chǎn)生和卵巢結(jié)構(gòu)的改善[30,33]。
MSCs對(duì)CTX或順鉑等抗癌藥物誘導(dǎo)的基質(zhì)細(xì)胞或顆粒細(xì)胞凋亡具有保護(hù)作用（表1）。MSCs產(chǎn)生的一些細(xì)胞因子，包括VEGF、HGF和IGF-1，可能在體內(nèi)抑制顆粒細(xì)胞凋亡，上調(diào)B細(xì)胞淋巴瘤-2的表達(dá)[51]。
MSCs的另一個(gè)預(yù)期機(jī)制是其抗纖維化作用。卵巢纖維化與多種細(xì)胞因子有關(guān)，包括基質(zhì)金屬蛋白酶、基質(zhì)金屬蛋白酶組織抑制劑、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-1、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子和內(nèi)皮素-1。MSCs可以抑制FB細(xì)胞的增殖，減少細(xì)胞外基質(zhì)的沉積[51]。
血管生成是卵巢恢復(fù)的重要機(jī)制。血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子-2，特別是來(lái)自MSCs的血管生成素，誘導(dǎo)新生血管形成，促進(jìn)受損卵巢組織的血液灌注[44,51]。人胎盤間充質(zhì)干細(xì)胞移植后，通過(guò)調(diào)節(jié)T細(xì)胞及相關(guān)細(xì)胞因子恢復(fù)POF小鼠卵巢功能[29]。人羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞移植到自然衰老小鼠體內(nèi)12-14個(gè)月后，移植的間充質(zhì)干細(xì)胞通過(guò)分泌表皮生長(zhǎng)因子和HGF在抑制卵巢衰老中發(fā)揮重要作用[22]。然而，MSC移植促進(jìn)卵巢功能的機(jī)制尚需進(jìn)一步研究。
表1：MSc支持的卵巢功能研究
間充質(zhì)干細(xì)胞；環(huán)磷酰胺
一種新的卵巢功能恢復(fù)候選MSCs
臨床應(yīng)用需要多劑量間充質(zhì)干細(xì)胞，劑量范圍為每公斤體重100-500萬(wàn)個(gè)細(xì)胞[52]，在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中，每只小鼠或大鼠的細(xì)胞數(shù)為100-50萬(wàn)個(gè)單位。然而，從成人組織中獲得MSCs需要合適的供體，而且在大多數(shù)情況下，需要進(jìn)行有創(chuàng)手術(shù)。此外，長(zhǎng)期培養(yǎng)可能會(huì)增加誘發(fā)染色體畸變和異質(zhì)細(xì)胞群的風(fēng)險(xiǎn)，使協(xié)議難以標(biāo)準(zhǔn)化[52]。
人胚胎干細(xì)胞（hESCs）來(lái)源于囊胚的內(nèi)部細(xì)胞團(tuán)，具有多種分化潛能。一些研究表明，MSCs可以從hESCs中獲得，hESCs表達(dá)MSC的表面標(biāo)記，并分化為三個(gè)胚胎層（如軟骨細(xì)胞、成骨細(xì)胞和脂肪細(xì)胞）[53]。此外，據(jù)報(bào)道，這些細(xì)胞在體外實(shí)驗(yàn)中發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)作用[54]。HESC來(lái)源的MSCs相當(dāng)于骨髓或脂肪來(lái)源的MSCs，使其成為恢復(fù)卵巢功能的MSCs的替代來(lái)源[52]。然而，與人類胚胎的使用有關(guān)的倫理問(wèn)題仍然存在，并且關(guān)于移植過(guò)程中HESCs不受歡迎的、意外的或未控制的差異的擔(dān)憂仍在討論中。然而，基于hESCs和hESC衍生MSCs的各種疾病的臨床試驗(yàn)已經(jīng)開(kāi)始[55]。誘導(dǎo)多能干細(xì)胞（IPSC）可能是MSCs的另一來(lái)源。IPSCs可以通過(guò)微創(chuàng)手術(shù)獲得，避免了胚胎使用和hESCs的倫理問(wèn)題。此外，使用autos或HLA匹配的iPSCs可以最大限度地減少免疫問(wèn)題[56,57]。
MSCs的另一個(gè)候選者是外體，外體是由細(xì)胞分泌的膜生物納米粒。它們?cè)谙到y(tǒng)中循環(huán)，攜帶mRNA、長(zhǎng)的非編碼RNA、microRNA、蛋白質(zhì)和脂質(zhì)。在腫瘤生理學(xué)中，細(xì)胞增殖、凋亡、細(xì)胞因子產(chǎn)生、免疫調(diào)節(jié)和轉(zhuǎn)移等過(guò)程中都存在細(xì)胞外體的刺激或抑制作用[58]。MSC介導(dǎo)的細(xì)胞治療中的外體在許多疾病模型中被發(fā)現(xiàn)，并被發(fā)現(xiàn)促進(jìn)功能恢復(fù)[59]。人脂肪或臍血來(lái)源的MSCs改善了卵巢早衰小鼠模型的卵巢功能[60,61]。但是，在外顯子的分離、表征和管理方面還存在一些標(biāo)準(zhǔn)化問(wèn)題[59,62]。
MSCs的安全問(wèn)題
間充質(zhì)干細(xì)胞的安全性應(yīng)該得到重視，因?yàn)榻o藥后觀察到輕微的不良反應(yīng)。最嚴(yán)重的副作用是長(zhǎng)期培養(yǎng)的MSCs促進(jìn)了腫瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移。臨床MSCs的產(chǎn)生需要大量的細(xì)胞，需要體外擴(kuò)增，但高代MSCs可能導(dǎo)致細(xì)胞轉(zhuǎn)化。根據(jù)病情的嚴(yán)重程度，確定最佳給藥劑量和給藥時(shí)間。有必要了解間充質(zhì)干細(xì)胞的調(diào)控機(jī)制，制定相應(yīng)的管理方法。
結(jié)論
MSCs已成為細(xì)胞治療臨床應(yīng)用中最有效的細(xì)胞類型。多發(fā)性退行性疾病和一些免疫相關(guān)疾病已被報(bào)道對(duì)MSC移植有反應(yīng)。骨髓、脂肪組織、臍帶、臍血、胎盤、羊水、子宮內(nèi)膜、臍帶沃頓膠和經(jīng)血的MSCs是成功的實(shí)驗(yàn)對(duì)象。
據(jù)報(bào)道，MSCs通過(guò)上調(diào)顆粒細(xì)胞AMH激素和FSH受體的表達(dá)，抑制顆粒細(xì)胞凋亡和卵泡閉鎖，促進(jìn)卵巢功能的恢復(fù)目前，對(duì)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的再生和利用以恢復(fù)卵巢功能的研究，可以給POF患者和不孕或亞生育婦女帶來(lái)希望。
